五靈脂(Faecestrogopterori)為鼯鼠科動(dòng)物復(fù)齒 鼯鼠(Trogopterusxanthipes)的 干 燥 糞 便,其 性 溫,味咸?甘,歸肝?心經(jīng),具有活血?化瘀和止痛的功 效,主治胸肋?脘腹刺痛?痛 經(jīng)?經(jīng) 閉?產(chǎn) 后 血 瘀 疼 痛?跌撲腫痛?蛇蟲(chóng)咬傷?心血管和婦科疾病?作 為傳統(tǒng)中藥,五靈脂已被廣泛應(yīng)用?在商洛,養(yǎng)殖鼯 鼠被作為廣大農(nóng)民脫貧致富奔小康的主要產(chǎn)業(yè)而被 大力發(fā)展?現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)《中國(guó)藥典》1977年版和 1990年版僅記 載 其 來(lái) 源 和 性 狀,《陜西 省 藥 材 標(biāo) 準(zhǔn)》 2015年版雖然增加了其顯微和薄層色譜,但 未 有 指 標(biāo)性成分 TLC鑒別和含量測(cè)定,一些不法商販趁機(jī) 唯利是圖,以老鼠和其他動(dòng)物糞便冒充五靈脂,更有 甚者將泥土和側(cè)柏葉粉碎后用機(jī)器制作假冒五靈脂? 為了給藥品監(jiān)督管理部門(mén)嚴(yán)厲打擊制售假冒偽劣五 靈脂提供技術(shù)支撐,本文在對(duì)五靈脂化學(xué)成分研究的 基礎(chǔ)上對(duì)五靈脂的幾種藥用成分進(jìn)行 HPLC 分 析,以期提供更科學(xué)?規(guī)范的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

Waterse2695型高效液相色譜儀(美國(guó)沃特世公司);賽多利斯SQP型電子分析天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司);DK-8D型電熱恒溫水 槽(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);四號(hào)藥篩(湖南省常德粒度分析儀器廠)。

槲皮素對(duì)照品(批號(hào)100081-200907,質(zhì) 量分 數(shù) 為 96.5%),山 柰 素 對(duì) 照 品 (批 號(hào) 110861- 201611,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95.5%)和穗花杉雙黃酮對(duì)照品 (批號(hào)110729-200411,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為97.7%),均購(gòu) 自 中國(guó)食品藥品檢定研究院;五靈脂樣品(分別購(gòu)自陜 西省商州區(qū)?山 陽(yáng) 縣 和 丹 鳳 縣);甲醇,色 譜 純(美 國(guó) SigmaAldrich公司);水,超純水(上海和泰儀器有限 公司 HHitech純水機(jī)現(xiàn)制)。

精密稱取五靈脂樣品(商州區(qū)3批,丹鳳縣3批,山陽(yáng) 縣3批以及商州區(qū)野生2批)粉末(過(guò)四號(hào)篩)3.0g,置于索氏提取器中,加乙醚適量,加熱回流至提取液 無(wú)色,棄 去 乙 醚 液,藥 渣 揮 干 乙 醚,加 體 積 分 數(shù) 為 70%的乙醇50mL,加熱回流1h,趁熱濾過(guò),濾液蒸 干,殘?jiān)铀?5mL使溶解,加鹽酸5mL,100 ℃加 熱水解 45 min,立 即 冷 卻,用 乙 酸 乙 酯 振 搖 提 取 3 次,每次20mL,合并乙酸乙酯液,用水洗滌3次,每 次20mL,水浴蒸干,殘?jiān)蛹?醇10mL 使溶 解,作 為供試品溶液?精密稱取槲皮素?山柰素和穗花杉雙 黃酮對(duì)照品適量,加乙醇制成質(zhì)量濃度分別為0.1, 0.2和0.1mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液,再精密稱 取槲皮素?山柰素和穗花杉雙黃酮對(duì)照品適量,加乙 醇制成質(zhì)量濃度分別為0.5,0.2和0.5mg·mL-1 的對(duì)照品溶液?分別吸取上述供試品溶液?混合對(duì)照 品溶液和對(duì)照品溶液各5μL,點(diǎn)于同一硅膠 G 薄層 板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)2~8 ℃的上 層溶液為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以10mL·L-1 的三氯化鋁乙醇溶液,置 于 紫 外 光 燈 365nm 處檢 視?供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上, 顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)?見(jiàn)圖1。

流動(dòng)相為甲醇(A)-4mL·L-1磷 酸溶液(B)(60∶40);流速為0.8mL·min-1;波長(zhǎng) 為375nm;柱溫為25℃;進(jìn)樣體積為10μL

精密稱取槲皮素?山柰素 和穗花杉雙黃酮對(duì)照品適量,分別加甲醇溶解并定容 至刻度,制成含槲皮素?山柰素和穗花杉雙黃酮對(duì)照品 質(zhì)量濃度分別為0.054,0.188和0.223mg·mL-1的混 合對(duì)照品溶液。

精密稱取五靈脂樣品(山陽(yáng) 縣)3.0g,研細(xì),過(guò)四號(hào)篩,置于索氏提取器中,加 乙 醚60mL,加熱回流至提取液無(wú)色,棄乙醚液,藥渣揮 干乙醚,加入體 積 分 數(shù) 為70%的乙 醇 溶 液100mL, 加熱回流1h,趁熱過(guò)濾,蒸干濾液,殘?jiān)铀?5mL使溶解,加鹽酸6mL,100 ℃加熱水解45min,立即 冷卻,用乙酸乙酯振搖提取3次,每次20mL,合并乙 酸乙酯液,用水洗滌3次,每次10mL,用乙酸乙酯液 減壓回收溶劑,殘?jiān)蛹状际谷芙?分次移至10mL 量瓶中,加甲醇 定 容 至 刻 度,搖 勻,過(guò)0.45μm 微孔 濾膜,即得。

圖１ ＴＬＣ圖 １．混合對(duì)照品

3 討論

五靈脂提取方法的選擇 本 研 究 參 考 已 有 文 獻(xiàn)，分別選取體積分?jǐn)?shù)為５０％，７０％和９０％的乙醇及 甲醇－２５％鹽酸溶液（４∶１）為提取溶劑，回流１ｈ，發(fā) 現(xiàn)體積分?jǐn)?shù)為７０％的乙 醇 提 取 效 果 最 好；對(duì) 加 入 的 鹽酸量的控制分別比較了３，５和６ｍＬ，發(fā)現(xiàn)加入的 鹽酸量會(huì)直接影響水解效果和３個(gè)成分的含量高低， 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樣品在其他條件不變的情況下，加入 ６ｍＬ鹽酸時(shí)３個(gè)成分含量最高；經(jīng)過(guò)對(duì)水解溫度的 考察，樣品在其 他 條 件 不 變 的 情 況 下，分 別 在５０，８０ 和１００℃進(jìn)行水解，液相含量測(cè)定結(jié)果顯示在１００℃ 下水解的樣品，峰形分離度最好，峰面積最優(yōu)，理論塔 板數(shù)最佳，故選擇水解溫度為１００ ℃。