他克莫司是從鏈霉菌屬中分離出的一種高效 免疫抑制劑，廣泛應(yīng)用于臨床器官移植術(shù)后的抗 免疫排斥反應(yīng)中。但他克莫司應(yīng)用存在多種不良反應(yīng)，其中最主要的是移植后新發(fā)糖尿病(new onset diabetes after transplantation，NODAT)，導(dǎo)致 移植相關(guān)并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)增加，如排斥反應(yīng)、移植物功能減退或喪失以及感染，影響受者長(zhǎng)期存活率。

健康 SD 大鼠，SPF 級(jí)，40 只，體質(zhì)量 180~220 g，♀♂各半，由溫州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中 心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK(浙)2005-0061。

滇結(jié)香花(西藏月王生物科技有限公司)由溫 州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院林崇良副主任藥師鑒定 為瑞香科植物結(jié)香 Edgeworthia gardneri (wall.) Meisn.的花蕾。取滇結(jié)香花 4.5 kg，粉碎，95%乙 醇常溫浸提 3 次，過濾，合并濾液，乙酸乙酯萃 取，減壓濃縮并真空干燥得到 EG 13.5 g。將提取 物換算成生藥并配成相當(dāng)于生藥含量 15 mg·mL?1 濃度的溶液，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。羅格列酮(國(guó)藥 準(zhǔn)字 H20030569，成都恒瑞制藥有限公司，批號(hào)： 150607；規(guī)格：每片 4 mg)；他克莫司注射液(國(guó) 藥準(zhǔn)字 J20090136，安斯泰來制藥有限公司，批號(hào)： 5A3290A；規(guī)格：每支 1 mL)。

大鼠胰島素ELISA試劑盒(批號(hào)：R20160122)、糖化血紅蛋白試劑盒(批號(hào)：20160120)、蘇木素(批 號(hào)：20150225)、伊紅(批號(hào)：20150225)均購(gòu)自南 京建成生物工程研究所；無水乙醇(杭州龍山精細(xì) 化工有限公司，批號(hào)：20150912)；中性樹膠(中國(guó) 上海標(biāo)本模型廠，批號(hào)：20150901)；Trizol(碧云 天公司，批號(hào)：061716161009)；cDNA 逆轉(zhuǎn)錄試 劑盒(美國(guó) Thermo 公司，批號(hào)：00424956)； SYBRGreen(Roche 公司，批號(hào)：18570700)；GAPDH 抗體(美國(guó) Bioworld 公司，批號(hào)：AA55151)；胰島 素受體底物蛋白 2(insulin receptor substrate 2， IRS-2)抗體(美國(guó) Santa cruz biotechnology 公司，批 號(hào) ： E2716)；辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠 IgG(biosharp 公司，批號(hào)：1266710212)；PCR 引 物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。實(shí)驗(yàn)所用 其他化學(xué)試劑均為分析純。

便攜式血糖儀、血糖試紙(長(zhǎng)沙三諾生物傳感 股份有限公司，批號(hào)：3703NC)；FA1204C 型電子 天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；DHG-9203A 型 電熱恒溫干燥鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏)； Olympus 光學(xué)顯微鏡、日立 7180 型全自動(dòng)生化儀 均來自日本日立公司； 7500 熒光定量 PCR 儀(美 國(guó) Applied Biosystems 公司)；ThermoLegend Micro 17R 微量離心機(jī)(美國(guó) Thermo 公司)；Mycycler 梯 度 PCR 擴(kuò)增儀、電泳系統(tǒng)、垂直電泳槽、Molecular Imager 均來自美國(guó) Bio-Rad 公司。

SD 大鼠 40 只隨機(jī)分為正常組、模型組、滇 結(jié)香花組和羅格列酮組，每組 10 只。參照文獻(xiàn)采 用單因素腹腔注射他克莫司的方法建立糖尿病大 鼠模型，除正常組外其余各組大鼠給予腹腔 注射 1 mg·kg?1 ·d?1 他克莫司，正常組腹腔注射等體 積生理鹽水。以 2018 年 ADA 糖尿病醫(yī)學(xué)診療標(biāo) 準(zhǔn)，空腹血糖≥7.0 mmol·L?1 (空腹 8 h 以上)作為糖 尿病誘導(dǎo)成功；造模的同時(shí)進(jìn)行藥物干預(yù)，正 常組與模型組大鼠灌胃等體積純水，滇結(jié)香花組 (150 mg·kg?1 ·d?1 )灌胃 EG 溶液，羅格列酮組 (0.4 mg·kg?1 ·d?1 ) 灌胃羅格列酮，灌胃容積 10 mL·kg?1 ，連續(xù) 15 d。

給藥第 15 天，禁食 8 h 后，給予 10%水合氯醛腹腔注射麻醉(0.3 mL·kg?1 )，固定，消毒。下腔 靜脈取血，分離血清；取大鼠胰腺，生理鹽水清 洗，濾紙吸去多余水分，4%多聚甲醛固定；另取 同部位組織，迅速冷凍于?80 ℃冰箱，用于 RT-PCR 及 Western blot 試驗(yàn)。

動(dòng)物一般情況觀察：每天觀察大鼠飲食飲水、 精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、大便性狀及尿量，隔日測(cè)體質(zhì)量并記錄；全自動(dòng)生化儀測(cè)血糖；ELISA 法 測(cè)定胰島素含量；比色法測(cè)定糖化血紅蛋白含量； 胰腺作石蠟切片，HE 染色，并用光學(xué)顯微鏡觀察 胰腺胰島細(xì)胞受損情況。

胰島素分泌指數(shù)(HOMA-β)、胰島素抵抗 指數(shù)(HOMA-IR) 根據(jù)所測(cè)空腹血糖水平(FPG)、空腹胰島素水 平 (FINS) 計(jì) 算 HOMA-β=20×FINS/(FBG?3.5) ， HOMA-IR=FPG×FINS/22.5。

正常組大鼠體質(zhì)量增加明顯，精神狀況良好， 皮毛有光澤，動(dòng)作自如，反應(yīng)靈敏。模型組大鼠 較暴躁，尿量無明顯變化。與正常組比，羅格列 酮組大鼠后期體重均值略升高；滇結(jié)香花組大鼠 體重略降低，并出現(xiàn)不同程度反復(fù)腹瀉，3 只出現(xiàn) 消瘦，無白內(nèi)障及尾、足壞死，動(dòng)作自如，反應(yīng) 靈敏度降低。各組每日進(jìn)食量和飲水量保持穩(wěn)定， 組間比較無顯著性差異。與正常組比，模型組大鼠血糖、胰島素抵抗 指數(shù)、糖化血紅蛋白升高(P<0.01)，胰島素、胰島 素分泌指數(shù)降低(P<0.05，P<0.01)。與模型組比， 滇結(jié)香花組血糖、糖化血紅蛋白降低(P<0.05， P<0.01)，胰島素、胰島素分泌指數(shù)升高(P<0.05， P<0.01)；羅格列酮組大鼠血糖、糖化血紅蛋白降 低(P<0.01)，胰島素、胰島素分泌指數(shù)升高(P<0.01)。病理檢查表明正常組大鼠胰腺組織切片中胰 島多為圓形或橢圓形細(xì)胞團(tuán)，分散于胰腺腺泡之 間，細(xì)胞團(tuán)大小不一，胰島細(xì)胞為多邊形，排列 整齊，分布均勻，胞漿淡染呈淺粉紅色，核多為 圓形深染。模型對(duì)照組大鼠胰腺組織切片中胰島 細(xì)胞可見脂質(zhì)空泡，細(xì)胞核大小不等，細(xì)胞排列 紊亂。滇結(jié)香花組大鼠胰腺組織切片中胰島細(xì)胞 形態(tài)結(jié)構(gòu)改善，部分細(xì)胞發(fā)生空泡變性。

目前據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，已從滇結(jié)香花中分 離出的化合物主要有香豆素類、黃酮類、揮發(fā)油 類、甾類、有機(jī)酸及含氮化合物等。其中滇結(jié) 香花甲醇提取物的各萃取相具有抗氧化能力； 滇結(jié)香花粗提物能促進(jìn)胰島素的分泌，顯著降低 小鼠餐后血糖濃度；滇結(jié)香花乙酸乙酯部位和 正丁醇部位均能顯著抑制高濃度葡萄糖致糖尿病小鼠、鹽酸腎上腺素致糖尿病小鼠、四氧嘧啶致 糖尿病小鼠血糖的升高；滇結(jié)香花提取物能激 活 PPARβ 和 PPARγ，用于治療糖尿病腎病。綜上所述，EG 具有明顯的降低糖尿病模型大 鼠空腹血糖、血漿糖化血紅蛋白含量的作用。其 作用機(jī)理可能為通過胰腺胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中 胰島素受體底物，修復(fù)胰島 β 細(xì)胞，保護(hù)胰腺，促 進(jìn)胰島素分泌，從而降低血糖。

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