精宏鼓風(fēng)干燥箱對膝骨性關(guān)節(jié)炎家兔關(guān)節(jié)滑膜組
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發(fā)布日期:2019-09-09 09:39【大 中 小】
骨性關(guān)節(jié)炎( OA) 是骨傷科最常見的疾病,隨 著我國人口老齡化趨勢加速,骨性關(guān)節(jié)炎的患者也 逐年增加,其中膝關(guān)節(jié)是骨性關(guān)節(jié)炎最常見最多發(fā) 病的部位。隨著病情發(fā)展,引起的直接后果就是 活動受限,喪失勞動力,嚴(yán)重者可導(dǎo)致殘廢。蒙藥 森登 - 4 味湯由文冠木、訶子、梔子、川楝子等藥味 組成,有著清熱燥黃水的功能,主治痛風(fēng)、痹病、關(guān) 節(jié)黃水病、關(guān)節(jié)水腫等,在臨床上廣泛用于治療關(guān) 節(jié)炎及水腫等病癥。
1 材料
1. 1 動物
健康成年家兔 70 只,清潔級,雌雄不 限,體質(zhì)量( 2. 5 ± 0. 2) kg,由長春億斯實(shí)驗(yàn)動物技 術(shù)有限公司提供,實(shí)驗(yàn)動物許可證號: SCXK( 吉) 2016 - 001。適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 周。
1. 2 藥品與試劑
森登 - 4 味湯: 由文冠木、訶子、 梔子、川楝子等藥味組成,內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī) 院制劑室制備成散劑,加 50 mL 蒸餾水制成混懸液 備用。白介素 - 1β、腫瘤壞死因子 - α、轉(zhuǎn)化生長因 子 - βELISA 檢測試劑盒: 上海源葉生物技術(shù)有限公 司; 戊巴比妥鈉: 上?;瘜W(xué)試劑有限公司。
1. 3 主要儀器
AUY - 120 電子天平( max 201g d = 0. 01mg) : 日本島津公司; TG16 - WS 臺式離心機(jī): 長沙湘瑞離心機(jī)有限公司; DY89 - 1 電動勻漿 機(jī): 寧波電子科技有限公司; Sunrise M7. 2 型多功能 酶標(biāo)儀: 美國 Molecular Devices; 上海精宏DHG-9140A恒溫干燥箱: 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司; 冰箱: 青島海爾公司。
2 方法
80 只成年家兔恒溫恒濕條 件下適應(yīng)性喂養(yǎng) 7 d 后,隨機(jī)選取 64 只家兔采用改 良 Hulth 法進(jìn)行動物模型制造,其余 16 只做正常 對照組。實(shí)驗(yàn)家兔稱重,編號,用 30 g /L 戊巴比妥 鈉耳緣靜脈注射麻醉( 30 mg / kg) 后,將兔固定于手 術(shù)臺上,雙膝伸直位。常規(guī)剃毛、消毒、鋪巾。于兔 右側(cè)膝關(guān)節(jié)髕內(nèi)側(cè)作長約 2. 5 cm 的縱行皮膚切口, 切斷內(nèi)側(cè)副韌帶,完整摘除內(nèi)側(cè)半月板,切斷前交 叉韌帶。建模時注意保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨面不受損傷; 徹 底止血,逐層縫合,常規(guī)消毒包扎。術(shù)后 1 周肌注青 霉素 40 萬 U / d,以防感染。之后進(jìn)行每天 3 次驅(qū) 趕,每次驅(qū)趕時間至少 30 min,4 周后經(jīng)檢查關(guān)節(jié)軟 骨面粗糙、軟骨外觀呈灰黃色、無正常透明度及光 澤可見明顯缺損及骨贅形成,顯示動物模型制造成 功。將成模大鼠隨機(jī)分為 4 組,模型組和森登 - 4 味湯高( 45 mg / kg) 、中( 30 mg / kg) 、低劑量( 15 mg / kg) 組,每組 16 只,各組給予相應(yīng)計量灌胃給藥, 模型組、正常組蒸餾水灌胃,每天 1 次,連續(xù)給藥 28 d。末次給藥后 24 h,處死( 空氣栓塞法) 家 兔,在無菌條件下,用剪刀自股骨下段及脛骨上段 分別剪取完整膝關(guān)節(jié),切開關(guān)節(jié),顯露膝關(guān)節(jié)腔,肉 眼觀察關(guān)節(jié)軟骨的顏色、光澤、光滑度、滑膜充血腫 脹等情況,然后取關(guān)節(jié)滑膜組織,進(jìn)行組織勻漿,用 酶聯(lián)免疫法檢測白細(xì)胞介素( IL - 1β) 、腫瘤壞死因 子( TNF - α) 、轉(zhuǎn)化生長因子( TGF - β) 含量,操作 嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。
3 結(jié)果
正常對照組家兔隨 飼養(yǎng)時間的增長,精神狀態(tài)良好,被毛光澤,行動自 如,無異常狀態(tài)。造模成功家兔精神萎靡,不喜活 動,進(jìn)食及飲水量均減少,被毛干枯且無光澤,活動 量明顯減少; 膝關(guān)節(jié)出現(xiàn)輕微的炎癥反應(yīng)及關(guān)節(jié)部 位出現(xiàn)腫脹,陸續(xù)出現(xiàn)出現(xiàn)關(guān)節(jié)全部水腫且伴有關(guān) 節(jié)活動功能障礙情況,出現(xiàn)關(guān)節(jié)紅腫和軟組織腫 脹,隨之逐漸消退,關(guān)節(jié)部位僵硬,活動明顯受限, 不愛活動。森登 - 4 味湯給藥組較模型組病情有所 好轉(zhuǎn),進(jìn)食及飲水均增加,體質(zhì)量有所增加,精神狀 態(tài)良好,被毛變光澤,行動轉(zhuǎn)好。