0 引言

蜈蚣藻是大型紅藻，生長(zhǎng)在低潮線，中國沿海地區(qū) 均有分布，可以進(jìn)行規(guī)?；娜斯ゐB(yǎng)殖。蜈蚣藻多糖 是一種硫酸酯多糖，具有抗腫瘤、抗病毒、抗凝血 、 降血脂、降血糖 、抗疲勞等眾多生物活性。益生元是指不被宿主消化吸收卻能有選擇性地促進(jìn)其體內(nèi)雙 歧桿菌等有益菌的生長(zhǎng)和繁殖，從而改善宿主健康的 有機(jī)物質(zhì)。益生元目前有功能性低聚糖類、多糖類、天 然植物提取物、多元醇等類別 。目前研究主要集中 在低聚糖類物質(zhì)，如瓊膠寡糖和褐藻膠低聚糖都是新型益生元。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)于2018年7—8月在中國科學(xué)院海洋研究所實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料、儀器

1.2.1 材料

蜈蚣藻由中國科學(xué)院海洋研究所提供，雙 歧桿菌由青島優(yōu)比特生物技術(shù)有限公司提供，大腸桿 菌為中科院海洋研究所生物技術(shù)中心保存菌種，金黃 色葡萄球菌為中科院海洋研究所生物技術(shù)中心保存菌 種。

1.2.2 試劑

95%乙醇（國產(chǎn)分析純級(jí)），MRS固體培養(yǎng) 基（青島日水生物技術(shù)有限公司），MHB培養(yǎng)基（青島 海博生物技術(shù)有限公司）。

1.2.3 主 要 儀 器

Hitech- Kflow Water Purification System（上海和泰儀器有限公司），SARTORIUS 精密 分析天平（德國 SARTORIUS 公司），RV10 旋蒸儀（德 國IKA公司），YXQ-LS-100A壓力蒸汽滅菌鍋（上海博 訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），F(xiàn)D-1冷凍干燥機(jī)（北京德天佑科技發(fā)展有限公司），DK-S24精宏水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），DHG-9070A烘箱（上海精宏 實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），超聲清洗儀，96 孔板，接種環(huán)， iMark酶標(biāo)儀（BIO-RAD公司），78-1型磁力加熱攪拌 器（常州國畫電器有限公司），722S分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司），AIRTECH潔凈工作臺(tái)（蘇州 安泰空氣技術(shù)有限公司），電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏 實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 蜈蚣藻多糖的制備

用燒杯稱量 40 g 干燥蜈蚣 藻，用剪刀剪碎，置于錐形瓶中，封口，加水至料液比1: 60。使用壓力蒸汽滅菌鍋100℃加熱120 min，篩去雜 質(zhì)后進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，將其灌入透析袋中依次使用 靜水、流水、蒸餾水進(jìn)行透析除鹽，第2次旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃 縮后加3倍體積的95%乙醇醇沉（過夜）。過濾并收集 沉淀，將其平鋪于物料盤中冷凍干燥12 h得到蜈蚣藻 粗多糖。干燥至恒重后，計(jì)算提取率并將其在陰涼通風(fēng)處保存。

1.3.2 蜈蚣藻多糖對(duì)雙歧桿菌益生效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)

（1）配制MRS固體培養(yǎng)基200 mL，滅菌后取3 mL 于厭氧管中制成斜面。配制100 mL 1%的雙歧桿菌菌 液（1 g固體菌粉溶于100 mL無菌水），取100 μL接種 于厭氧管中，充氮?dú)鉅I造厭氧環(huán)境，37℃下培養(yǎng)48 h后 轉(zhuǎn)入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br /> （2）配制液體 MRS 培養(yǎng)基，分裝至錐形瓶中，滅 菌，迅速冷卻至室溫后用接種環(huán)接種培養(yǎng)48 h的雙歧 桿菌，封口后再用 parafilm 封口膜封口，防止氧氣進(jìn) 入，37℃下靜置培養(yǎng)48 h。
（3）準(zhǔn)確稱取蜈蚣藻多糖樣品 0.100 g，在超聲清 洗儀下溶于10 mL無菌水，配成1%的溶液后分別稀釋 為 0.8%、0.6%、0.4%、0.2%，使接種后濃度分別變?yōu)?0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%。將培養(yǎng)48 h的雙歧桿 菌菌液從錐形瓶底部吸取少許，用MRS液體培養(yǎng)基稀 釋至0.5個(gè)麥?zhǔn)媳葷岫?。分別吸取稀釋后的菌液和各 濃度糖樣品溶液100 μL于96孔板的微孔中，每個(gè)樣品 的每個(gè)濃度設(shè)置8個(gè)平行，對(duì)照組加入100 μL稀釋菌 液和100 μL無菌水。
（4）接種完畢后用酶標(biāo)儀在630 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸 光度，放于37℃靜置培養(yǎng)，之后保持每隔6 h檢測(cè)吸光 度值，每次檢測(cè)完都用parafilm封口膜將96孔板四周封住 。

2 結(jié)果與分析

蜈蚣藻多糖對(duì)雙歧桿菌生長(zhǎng)影響如圖 1，可以看出自接種6 h后各樣品開始明顯增長(zhǎng)，在12 h時(shí)低聚果 糖和陰性對(duì)照組樣品基本不再增長(zhǎng)達(dá)到平穩(wěn)，低聚果糖高于對(duì)照組，且隨低聚果糖濃度增大而增大。5 個(gè)蜈蚣藻多糖樣品在21 h之前一直比較接近并保持增 長(zhǎng)，但21 h之后濃度較高的0.5%、0.4%、0.3%保持平穩(wěn) 增長(zhǎng)，0.2%、0.1%在 24~42 h 中有明顯下滑，之后 42~48 h迅速增長(zhǎng)并接近0.5%、0.4%、0.3%。在66 h 5個(gè)蜈 蚣藻多糖樣品最終結(jié)果較接近，仍保持增長(zhǎng)趨勢(shì)，且顯 著高于低聚果糖組。

蜈蚣藻多糖與低聚果糖對(duì)金色葡萄球菌和大腸桿 菌作用結(jié)果較為接近，都沒有抑制作用，都具有較弱的 促進(jìn)生長(zhǎng)作用。鑒于低聚果糖已經(jīng)商業(yè)化并應(yīng)用于工 業(yè)及食品行業(yè)，可以初步判斷蜈蚣藻多糖較安全，但仍 需要進(jìn)行進(jìn)一步的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，以了解它在體內(nèi)復(fù)雜的 環(huán)境下被消化酶分解的情況，以及是否具有通過促進(jìn) 雙歧桿菌等有益菌的生長(zhǎng)抑制大腸桿菌等病原菌等有害菌生長(zhǎng)的作用。

3 結(jié)論

蜈蚣藻多糖對(duì)雙歧桿菌的增殖具有顯著的促進(jìn)作用，但是從0.3%濃度到0.5%濃度的增長(zhǎng)，沒有提升對(duì) 雙歧桿菌增殖的促進(jìn)作用，可見在此范圍內(nèi)蜈蚣藻多 糖濃度與益生效應(yīng)沒有明顯的相關(guān)關(guān)系，但蜈蚣藻多 糖的促進(jìn)作用顯著優(yōu)于低聚果糖。因此，蜈蚣藻多糖 具有較好益生效應(yīng)。蜈蚣藻多糖對(duì)雙歧桿菌增殖的促 進(jìn)作用與濃度在一定范圍內(nèi)具有一定正向關(guān)系，如果 經(jīng)過進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，可以被開發(fā)為一種新的、更為 高效的益生元，調(diào)節(jié)人體的免疫力、增強(qiáng)體質(zhì)，或者作 為雙歧桿菌的促生長(zhǎng)因子而應(yīng)用于酸奶的發(fā)酵工業(yè) 中。