新生兒溶血病（ＨＤＮ）指母嬰血型因 ＡＢＯ 血型不合而引起的同種免疫性疾病。ＡＢＯ 血型不合導(dǎo)致的 ＨＤＮ 是 新 生 兒 所 有 的 溶 血 性 疾 病 中 最 常 見 一 種，我 國(guó) 人 群 中 ＡＢＯ－ＨＤＮ 發(fā) 病 率 為 ２０％ ～ ２５％。

１ 資料與方法

１．１ 一般資料

選擇２０１７年４月至２０１８年８月本 院收治的疑似 ＡＢＯ－ＨＤＮ 患兒４８７例，臨床上均為母 嬰血型不合并伴有高膽紅素血癥，患兒及母親血型均 為 Ｒｈ（＋）。其 中 男 ２９２ 例，女 １９５ 例；年 齡 ２ｈ 至 １５ｄ。采集 患 兒 ＥＤＴＡ 抗 凝 靜 脈 血 ２～３ ｍＬ 進(jìn) 行 ＡＢＯ－ＨＤＮ 檢測(cè)。

１．２ 儀器與試劑

標(biāo)準(zhǔn) Ａ、Ｂ 血清試劑，標(biāo)準(zhǔn) ＡＢＯ 紅細(xì)胞，抗體篩選紅細(xì)胞采用上海血液生物醫(yī)藥責(zé)任 公司產(chǎn)品；酸放散試劑盒采用長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限 公司產(chǎn)品；所用儀器均采用北京斑珀斯公司的戴安娜 微柱凝膠卡、戴安娜專用離心機(jī)、戴安娜專用孵育器； ＤＫ－４２０型電熱恒溫水槽購(gòu)自上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限 公司。所有的試劑均在有效期內(nèi)使用。

１．３ 方法

１．３．１ 直接抗人球蛋白試驗(yàn)

取患兒待檢測(cè)的紅細(xì) 胞用生理鹽水配成１％的懸液５０μＬ，加入戴安娜抗 人球蛋白卡直接離心觀察結(jié)果。

１．３．２ 游離抗體試驗(yàn)

取戴安娜抗人球蛋白卡標(biāo)記 １～３孔分別加入１％標(biāo)準(zhǔn) Ａ、Ｂ、Ｏ 紅細(xì)胞５０μＬ后再 加入患兒血漿各５０μＬ，進(jìn)行檢測(cè)。

１．３．３ 放散細(xì)胞準(zhǔn)備

將待檢血標(biāo)本以３０００ｒ／ｍｉｎ 離心 １０ ｍｉｎ，吸 取 血 漿 層 放 入 另 一 試 管 備 用。 取 ２ｍＬ剩余的壓積紅細(xì)胞用０．９％生理鹽水進(jìn)行洗滌， 速度為３０００ｒ／ｍｉｎ，離心時(shí)間為５ｍｉｎ，洗滌３次后， 在兩支試管中分別加入洗滌好的壓積紅細(xì)胞各１ｍＬ， 準(zhǔn)備同時(shí)進(jìn)行熱放散和酸放散試驗(yàn)。

１．３．４ 熱放散試驗(yàn)

依 照 《全 國(guó) 臨 床 檢 驗(yàn) 操 作 規(guī) 程》進(jìn)行操作。在１ｍＬ 的壓積紅細(xì)胞中加入等體 積的生理鹽水，混勻，將試管放置在５６ ℃水浴中不斷 震動(dòng)７～８ｍｉｎ，取出后置入預(yù)先在５６ ℃水浴箱里預(yù) 溫的離心套管內(nèi)，立即以２０００ｒ／ｍｉｎ離心５ｍｉｎ，吸取上層液（即放散液）進(jìn)行檢測(cè)。

１．３．５ 酸放散試驗(yàn)

依照廠商的試劑盒的說(shuō)明書進(jìn) 行操作。在１ ｍＬ 的壓積紅細(xì)胞加入等體積的溶液 Ⅰ，混勻后，來(lái)回輕輕顛倒試管４次，以３０００ｒ／ｍｉｎ 離心１ｍｉｎ，轉(zhuǎn)移上清液至另外一潔凈試管。在放散 液中逐滴加入溶液Ⅱ，直至放散液變?yōu)樗{(lán)色為止（即 放散液由酸性轉(zhuǎn)變?yōu)橹行裕?。將中和后的?散 液 離 心，３０００ｒ／ｍｉｎ離心１ｍｉｎ，上清液用于抗體檢測(cè)。

１．４ 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用ＳＰＳＳ１９．０對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 計(jì)數(shù)資料 采 用 百 分 數(shù) 表 示，組比較 采 用χ ２ 檢 驗(yàn)。 以Ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

２ 結(jié) 果

４８７例疑似 ＡＢＯ－ ＨＤＮ 患兒中，確診為 ＡＢＯ－ＨＤＮ 共１３５例，檢出率為 ２７．７％（１３５／４８７）；其中母－嬰血型為 Ｏ－Ａ 型７０例，Ｏ－ Ｂ型５８例，Ａ－ＡＢ型７例。１３５例 ＡＢＯ－ＨＤＮ 患兒血 樣標(biāo)本中，熱 放 散 試 驗(yàn) 和 酸 放 散 試 驗(yàn) 均 為 陽(yáng) 性 １００ 例，檢出率為２０．５％；熱放散試驗(yàn)陽(yáng)性而酸放散試驗(yàn) 陰性６例，檢出率為１．２％；熱放散試驗(yàn)陰性而酸放散 試驗(yàn)陽(yáng)性２７例，檢出率為５．６％；熱放散和酸放散試 驗(yàn)均為陰性，但直接抗人球蛋白試驗(yàn)＋游離抗體釋放 試驗(yàn)陽(yáng)性２例，檢出率為０．４％。４８７例患兒中，兩種方法聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性檢出率為 ２７．３％（１３３／４８７），酸放散試驗(yàn)陽(yáng)性檢出率為２６．１％， 酸放散試驗(yàn)與兩種方法聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性檢出率比較，差 異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ ２＝４５７．２８，Ｐ＜０．００１）；熱放散試 驗(yàn)陽(yáng)性檢出率為２１．８％，熱放散試驗(yàn)與兩種方法聯(lián)合 檢測(cè) 陽(yáng) 性 檢 出 率 比 較，差 異 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義 （χ ２＝ ３６０．６３，Ｐ＜０．００１）。

３ 討 論 　　

ＡＢＯ－ＨＤＮ 是由于母嬰血型不合而引起的免疫 性溶血性疾病，患兒臨床表現(xiàn)為水腫、黃疸、貧血、肝 脾腫大，嚴(yán)重者可發(fā)生膽紅素腦病，導(dǎo)致大腦損傷，引 起智力低下或者不可逆的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，更甚者威 脅到患兒的生命。因此早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，可 以避免后續(xù)癥狀的發(fā)生，減輕疾病對(duì)患兒造成的損 傷。目前，對(duì) ＡＢＯ－ＨＤＮ 的診斷主要通過 ＡＢＯ－ＨＤＮ ３項(xiàng)試驗(yàn)（直接抗人球蛋白試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn)和 紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)）進(jìn)行檢測(cè)。紅細(xì)胞抗體釋放 試驗(yàn)是診斷 ＡＢＯ－ＨＤＮ 最有力證據(jù)，陽(yáng)性結(jié)果表明患 兒紅細(xì)胞被母體ＩｇＧ 抗 Ａ（Ｂ）抗體致敏。酸放散試 驗(yàn)的原理是低 ｐＨ 值（酸性條件下）可以破壞蛋白質(zhì) 的靜電引力并改變其三級(jí)結(jié)構(gòu)，從而致敏紅細(xì)胞上除 Ｄｕｆｆｙ系統(tǒng)以外的大部分ＩｇＧ 抗體；熱放散試驗(yàn)原理 為溫度在５６℃時(shí)可將紅細(xì)胞表面結(jié)合的ＩｇＭ 類抗體 或 ＡＢＯ 系統(tǒng)ＩｇＧ 類抗體解離，相對(duì)于其他放散試驗(yàn)， 熱放散試驗(yàn)效果更效顯，更適合 ＡＢＯ 系統(tǒng)ＩｇＭ 抗體 的放散。